vanquish core高效液相色谱_高效液相色谱waters

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       好的，现在我来为大家谈一谈vanquish core高效液相色谱的问题，希望我的回答能够解答大家的疑惑。关于vanquish core高效液相色谱的话题，我们开始说说吧。

1.请问HPLC是什么意思？

2.高效液相质谱联用仪的工作原理，可以告诉我吗？

3.安捷伦高效液相1100进样模块高温报错

4.高效液相的原理,最好详细点

请问HPLC是什么意思？

       高效液相色谱 高效液相色谱的特点：

       高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。

       1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。

       高速——流速为0.1～10.0 mL/min。

       高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

       高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

       HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

       速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

       分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

       灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

       色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

       样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

高效液相质谱联用仪的工作原理，可以告诉我吗？

       高效液相色谱实验I. 色谱柱的评价

       请在实验前预习《基础分析化学实验（第二版）》137－140页。

       目的

       (1) 了解高效液相色谱仪的工作原理；

       (2) 学习评价液相色谱反相柱的方法。

       原理

       高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。它采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比，具有很高的柱效和分离能力。色谱柱是色谱仪的心脏，也是需要经常更换和选用的部件，因此，评价色谱柱是十分重要的。而且对色谱柱的评价也可以检查整个色谱仪的工作状况是否正常。

       评价色谱柱的性能参数主要有：

       （1）

       柱效（理论塔板数）n　

       式中tr为测试物的保留时间，W1/2为色谱峰的半峰宽。

       （2）

       容量因子k’　

       式中t0为死时间，通常用已知在色谱柱上不保留的物质的出峰时间作死时间。

       (3)

       相对保留值（选择因子）α　

       式中k1’和k2’分别为相邻两峰的容量因子，而且规定峰1的保留时间小于峰2的。

       (4)

       分离度Rs　

       式中tr1、tr2分别为相邻两峰的保留时间，Wb1、Wb2分别为两峰的底宽。对于高斯峰来讲，Wb=1.70W1/2。

       为达到好的分离，我们希望n、α和Rs值尽可能大。一般的分离（如α=1.2，Rs=1.5），需n达到2000。柱压一般为104 kPa 或更小一些。本实验采用多核芳烃作测试物，尿嘧啶为死时间标记物，评价反相色谱柱。

       仪器和试剂

       Waters 510高效液相色谱仪（由Waters 510高压输液泵，Rheodyne 7725i进样器，440检测器和记录仪组成）

       色谱柱：5 cm×4.6 mm I.D., YWG-C18H37 (ODS)，10 μm

       流动相：甲醇－水(80+20)

       样品I： 含尿嘧啶 (0.010 mg·mL－1)、萘 (0.010 mg·mL－1)、联苯 (0.010 mg·mL－1)、菲（0.006 mg·mL－1）的甲醇混合溶液；

       样品I I：尿嘧啶的甲醇溶液；萘的甲醇溶液；联苯的甲醇溶液；菲的甲醇溶液。溶液浓度约为0.01mg·mL－1；

       实验内容

       （1）准备流动相。将色谱纯甲醇和色谱纯水按比例配制200mL溶液，混合均匀并经超声波脱气后加入到仪器储液瓶中。

       （2）检查电路连接和液路连接正确以后，接通高压泵、检测器和记录仪的电源。设定操作条件为：流速1.0 mL·min－1，压力上限2?0?7104 kPa (约3000 psi)，检测波长254 nm（该仪器检测波长已固定），灵敏度0.2 AUFS，记录仪走纸速度1.0 cm·min－1，记录灵敏度为5 mV。开启记录仪走纸开关记录基线。并调节基线到合适位置（一般为距右10%处）。

       （3）待基线平稳后（建议观察检测器的读数显示），将进样阀手柄拨到“Load”的位置，使用专用的液相色谱微量注射器取5μL样品注入色谱仪进样口，然后将手柄拨到“Inject”位置，同时按一下检测器的标记按钮，同时计时，记录色谱图。

       （4）重复（3）的实验两次。

       （5）用同样方法进纯样品的甲醇溶液，确定出峰顺序。

       （6）根据三次实验所得结果计算色谱峰的保留时间、半峰宽，然后计算色谱柱参数n、k’，以及相邻两峰的α、Rs

       （7）将流速降为0，待压力降为0后关机。

       思考题

       1. 高效液相色谱与气相色谱相比有什么相同点和不同点？

       2. 如何保护色谱柱延长使用寿命？

       高效液相色谱实验II

       固相萃取水样中的多核芳烃并以内标法测定其含量

       目的

       （1）学习固相萃取法处理样品；

       （2）用内标法定量。

       原理

       固相萃取法是色谱法的一个重要的应用。在此方法中，使一定体积的样品溶液通过装有固体吸附剂的小柱，样品中与吸附剂有强作用的组分被完全吸附；然后，用强洗脱溶剂将被吸附的组分洗脱出来，定容成小体积被测样品溶液。使用固相萃取法，可以使样品中的组分得到浓缩，同时可初步除去对感兴趣组分有干扰的成分，从而提高了分析的灵敏度。固相萃取不仅可用于色谱分析中的样品预处理，而且可用于红外光谱、质谱、核磁共振、紫外和原子吸收等各种分析方法的样品预处理。C18固相萃取小柱具有疏水作用，对非极性的组分有吸附作用，因此可以从水中将多核芳烃萃取出来，完成浓缩样品的作用。固相萃取小柱还有其他类型，如极性、离子交换等。

        内标法的原理是，设在V mL样品中含有Wi g待测组分i，加入WS g内标物S，混匀后进样，得组分i及内标物S的峰面积分别为Ai及AS。由于峰面积正比于通过检测器的物质量，所以有：

       Wi=fi Ai

       WS =fS AS

       式中fi、fS分别为组分i和内标S的校正因子。

       两式相除，得　

       所以，组分i的体积浓度为：

       fi’可用已知被测物i和内标物浓度的样品进样分析得到。内标法是一种相对测量方法，因此，进样量不必准确，操作条件稍有变化对结果没有什么影响。

       仪器和试剂

       Waters 510高效液相色谱仪（由Waters 510高压输液泵，Rheodyne 7725i进样器和440检测器组成）

       色谱柱：5 cm×4.6 mm I.D., YWG-C18H37 (ODS)，10 μm

       流动相：甲醇－水(80+20) 流速：1.0 mL·min－1

       检测波长：254 nm

       C18固相萃取小柱：2支

       25 mL移液管：1支

       50 mL医用注射器：1支

       10 mL医用注射器：2支

       2 mL容量瓶：2个

       样品I：内标标准样，含萘(0.010 mg·mL－1)、联苯(0.010 mg·mL－1)、

        菲（0.006 mg·mL－1）的甲醇溶液。

       样品II：内标物溶液。含联苯（0.10 mg·mL－1）的甲醇溶液。

       样品III：含萘、菲的被测水样。

       实验内容

       （1）固相萃取小柱预处理：用10 mL注射器将2 mL甲醇压过小柱，再将2 mL纯水压过小柱。

       （2）用移液管取25 mL水样，用50 mL注射器压过小柱，这时水样中的萘和菲被吸附在小柱上。在小柱下端承接一2 mL的容量瓶，将约1.5 mL甲醇用10 mL注射器压过小柱到容量瓶中，加入一定量内标联苯溶液，定容摇匀，得到浓缩的样品。

       （3）按“实验I”中的步骤，进样分析内标标准样和浓缩样品各三次。

       （4）取平均结果，计算峰面积As和Ai；根据内标标准样的浓度计算fi’，再计算出浓缩样品中的萘和菲的浓度，进而计算出原水样中的浓度（mg·mL－1）。

       思考题

       1. 内标法与外标法各有哪些特点？ 本实验为什么采用内标法为好？

       为什么要对色谱分析中的样品进行预处理？简单列出三个以上的原因。

安捷伦高效液相1100进样模块高温报错

       储液器中的流动相被高压泵打入检测系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内。

       由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。

扩展资料

       液相色谱（LC）能够有效的将有机物待测样品中的有机物成分分离开，而质谱（MS）能够对分开的有机物逐个的分析，得到有机物分子量，结构（在某些情况下）和浓度（定量分析）的信息。

       电喷雾电离技术造就了LC-MS质谱图简洁，后期数据处理简单的特点。LC-MS为有机物分析实验室，药物、食品检验室，生产过程控制、质检等部门必不可少的分析工具。

       百度百科-高效液相色谱仪

       百度百科-液相色谱-质谱联用仪

高效液相的原理,最好详细点

高温报错的原因如下：

       1、进样模块有故障：进样模块在使用过程中可能出现故障，比如电路板损坏、温度传感器出现问题等，这些问题可能导致进样模块出现高温报错。此时可以尝试重新启动进样模块或进行相应的维修工作。

       2、进样模块周围环境温度过高：如果进样模块周围的环境温度过高，也有可能导致进样模块的温度过高，并产生高温报错。此时需要将进样模块放在温度适宜的环境中，避免周围温度过高。

       3、进样模块内部零部件堵塞：如果进样模块内部的某些零部件（如进样针等）被杂物堵塞，会导致进样模块的温度升高并产生高温报错。此时可以进行清理或更换零部件。

       4、进样管或进样嘴没有安装好：进样管或进样嘴没有正确安装也有可能导致进样模块的温度异常。可以检查进样管或进样嘴的连接是否紧固。

       安捷伦高效液相色谱仪1100系列的进样模块是用于自动进样和混合的部件，通常可配合不同的进样器和进样针使用。进样模块的主要功能是控制进样容积和组分浓度，确保样品的精确进样和分析。

       高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9?107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

       特点

        1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。

        2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。

        3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

        4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。

        5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。

       高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。

        高效液相色谱法的主要类型及其分离原理

       根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型：

       1 ．液 — 液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography)

       流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式：

       式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm--溶质在流动相中的浓度； Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。

        a. 正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。

        b. 反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。

        c. 液 — 液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相（见后），可克服上述缺点。现在应用很广泛（70~80%）。

       2 ．液 — 固色谱法

       流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表示如下：

       Xm + nSa ====== Xa + nSm

       式中：Xm--流动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--流动相中的溶剂分子。

        当吸附竞争反应达平衡时：

       K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]

       式中：K为吸附平衡常数。[讨论：K越大，保留值越大。]

       3 ．离子交换色谱法(Ion-exchange Chromatography)

        IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。

       以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：

       X-(溶剂中) + (树脂-R4N+Cl-)=== (树脂-R4N+ X-) + Cl- (溶剂中)

       当交换达平衡时：

       KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-]

       分配系数为：

       DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-]

       [讨论：DX与保留值的关系]

       凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。

       4 ．离子对色谱法(Ion Pair Chromatography)

       离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示：

       X+水相 + Y-水相 === X+Y-有机相

       式中：X+水相--流动相中待分离的有机离子（也可是阳离子）；Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；X+Y---形成的离子对化合物。

        当达平衡时：

       KXY = [X+Y-]有机相/[ X+]水相[Y-]水相

       根据定义，分配系数为：

       DX= [X+Y-]有机相/[ X+]水相= KXY [Y-]水相

       [讨论：DX与保留值的关系]

        离子对色谱法(特别是反相)发解决了以往难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。

       5 ．离子色谱法(Ion Chromatography)

       用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。以电导检测器为通用检测器，为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了抑制柱。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。

       以阴离子交换树脂（R-OH）作固定相，分离阴离子（如Br-）为例。当待测阴离子Br-随流动相（NaOH）进入色谱柱时，发生如下交换反应（洗脱反应为交换反应的逆过程）：

       抑制柱上发生的反应：

       R-H+ + Na+OH- === R-Na+ + H2O

       R-H+ + Na+Br- === R-Na+ + H+Br-

       可见，通过抑制柱将洗脱液转变成了电导值很小的水，消除了本底电导的影响；试样阴离子Br-则被转化成了相应的酸H+Br-，可用电导法灵敏的检测。

        离子色谱法是溶液中阴离子分析的最佳方法。也可用于阳离子分析。

       6 ．空间排阻色谱法(Steric Exclusion Chromatography)

       空间排阻色谱法以凝胶 (gel) 为固定相。它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径比分子筛要大得多，一般为数纳米到数百纳米。溶质在两相之间不是靠其相互作用力的不同来进行分离，而是按分子大小进行分离。分离只与凝胶的孔径分布和溶质的流动力学体积或分子大小有关。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上最后出现。

       高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、．分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。

        1．进样系统

        一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

        2．输液系统

        该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l．47～4．4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。

        3.分离系统

        该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

        另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。

        再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。

        4．检测系统

        高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

       （1）紫外检测器

        该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g／ml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。

       （2）示差折光检测器

        凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为10-7g／ml），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。

       （3）荧光检测器

        凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g／ml），痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。

       （5）数据处理系统

        该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

       好了，关于“vanquish core高效液相色谱”的话题就到这里了。希望大家通过我的介绍对“vanquish core高效液相色谱”有更全面、深入的认识，并且能够在今后的实践中更好地运用所学知识。